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    技術支持

    遠慕新聞: 人源血清學檢測二抗怎么選?

    發布時間:2020-06-11   點擊次數:588次

    血清學檢測是許多健康問題診斷過程中的關鍵檢測方法,包括器guan移植篩查,交叉匹配,疾病診斷,監測等。這些檢測在臨床決策中起著至關重要的作用,免疫分析是目前可用的qiang大,ling敏的血清學檢測方法之一,它基于抗原抗體之間的高度特異性結合,即使在低濃度下也能進行定性和定量檢測。有多種免疫測定方法,以下是其中chang見兩種檢測方法示意圖,分別是夾心法(圖1A)和直接法(圖1B),當選擇用于夾心法檢測的抗人二抗時(圖1A),需要考慮一抗的種屬,并使用與該物種有小交叉反應的二抗。

     

    血清學檢測

    圖1:測定方式:A.夾心法,B.直接法

     

    免疫分析多種疾病診斷起重要作用

     

    各類免疫測定技術各有優缺點,例如,快速測定法(如膠體金側向流動法)可在數min 內提供定性結果,可進行即時檢測,而ELISA可能需要花費數小時才能完成,但可提供定量數據。

     

    快速免疫測定法

     

    而當前嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2(SARS-CoV-2)大流行更加凸顯了側向流動分析的優勢,由于該疾病具有快速傳播和較高的死亡率等特征,美國FDA已采取相關措施,允許各州未經FDA批準就可開展新的SARS-CoV-2檢測。該修訂允許使用快速檢測試劑盒,該試劑盒定性檢測患者針對SARS-CoV-2產生的IgG和IgM抗體,從而顯著加大了SARS-CoV-2的檢測能力,盡可能地減少病毒的傳播。盡管側向流動檢測具有明顯的優勢,但這種分析方法無法提供定量的數據。

     

    SARS-CoV-2檢測

     

    表1.幾種類型的免疫測定法的優缺點,檢測過程,檢測Ig類

    免疫測定方法檢測過程可檢測免疫球蛋白
    快速測試/橫向流動(膠體金)膠體金層析試紙條主要由4個部分組成:在樣品區滴加樣品后,借助毛細作用,樣品泳動至玻璃纖維膜,金標復合物溶解,并與樣品進行抗原抗體反應,形成復合物,繼續泳動至硝酸纖維素膜的檢測區,帶有金標記的復合物被檢測區抗原或抗體捕獲,呈現條帶。而質控線不管有無目的樣本,都會與金標抗體進行結合并顯色,相當于我們的陽性對照,證明金標抗體是正常的。IgG,IgM
    流式細胞將血清樣品添加到帶有抗原的細胞或磁珠中,樣本中的人源抗體會捕獲抗原,再加入熒光探針偶聯的二抗(圖1B),然后可以通過流式細胞儀分析熒光以給出定量數據。IgG,IgM,IgA
    流動注射分析(FIA)與流式細胞術相似,將樣品注射到含有固定抗原的柱子中,樣品中的人源抗體會與抗原結合(圖1B),再加入熒光探針或酶偶聯抗人的二抗進行檢測,用比色或熒光法進行檢測。IgG,IgM,IgA
    ELISA法將一抗固定在固體介質表面上,通常是微孔板,隨后會捕獲抗原(圖1A)或將抗原直接包被在板上(圖1B),與來自血清的人源抗體結合,加入酶標記的抗人二抗,后,添加酶底物,從而得到與分析物濃度成正比的比色讀數。IgG,IgM,IgA
    聚合酶鏈反應(PCR)該過程類似于ELISA,但是第二抗體是與寡核苷酸綴合。然后通過實時PCR進行DNA擴增和檢測。IgG,IgM,IgA

     

    抗人二抗是各類免疫分析中的關鍵試劑
    抗人的二抗是各類免疫分析中的關鍵試劑

     

    盡管免疫測定的功能和目的有所不同,但為了在臨床上獲得準確,可靠數據,開發血清學試劑盒時,高質量試劑至關重要。抗人二抗的質量是開發免疫測定試劑盒時的關鍵考慮因素,二抗需要謹慎選擇,因為它們會結合一種一抗的多個表位上,從而增強了信號的靈敏度和選擇性。表2總結了在進行免疫測定選擇合適的二抗時需要考慮的多個方面。

     

    表2.在免疫分析中選擇合適的二抗時的考慮因素以及我們抗體的特征

     考慮因素Jackson 二抗
    抗體來源人體樣品的血清學檢測應使用抗人二抗,以da程度地減少非特異性結合,以da程度降低背景信號和假陽性。我們可以提供多種來源的抗人二抗,包括羊駝,驢,山羊,小鼠和兔子。
    產品類別
    (完整的IgG還是片段)
    二抗可以是完整的免疫球蛋白(Ig)G,也可以是F(ab')2和Fab片段,完整的IgG分子可適用于大多數檢測,而F(ab')2和Fab片段可用于避免與具有Fc受體的活細胞的非特異性結合。我們可以提供完整IgG形式的二抗以及F(ab')2和Fab片段
    特異性根據所需免疫測定的特異性,可以制備針對整個Ig分子的二抗,以及針對于Fc或F(ab')2結構域特異性的二抗。我們可以提供針對于對整個人源Ig分子的二抗,以及針對于Fc和F(ab')2結構域特異性的二抗。
    亞型大多數免疫測定均只檢測IgG型抗體,這種類型抗體占總血清Ig的?75%,是次級免疫反應的一部分。但是,血清中同時也存在IgM和IgA,而且二抗只對同亞型一抗的具有特異性。我們可以提供對IgG,IgM,IgA,IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一種或幾種亞型有特異性的二抗。
    親和純化和交叉吸附由于在Ig結構域具有高度的結構保守性,建議對抗體進行親和純化并進行交叉血清吸附的,以減少交叉反應的可能性。免疫親和層析可用于分離親和純化的抗體。我們可以選擇已進行物種交叉吸附的抗體,交叉吸附相關信息會在對應產品說明括號中提供,表示為“ min X”,“X”為相關物種的縮寫。
    偶聯標記二抗通常與分子偶聯,例如酶,熒光探針或有色顆粒。免疫測定的檢測系統將確定標記物的種類。抗人二抗可以與多種標記物偶聯,包括生物素,AP,HRP,熒光基團和膠體金納米顆粒。

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