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    技術支持

    牛血清實驗中常見的問題解析!

    發布時間:2021-10-26   點擊次數:231次

      胎牛血清通常在細胞培養中作為基礎生長培養基的添加劑,在細胞培養中,血清供應了豐富的高分子蛋白,低分子量營養物,疏水載體蛋白和其他體外細胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時,胎牛血清可以增加培養基的緩沖能力或中和有毒成分,起到保護細胞的作用。在細胞培養過程中是否選擇添加血清,主要根據基礎培養基化學成分,培養細胞的類型和培養體系而定。今天給大家分享的是牛血清實驗中常見的問題解析!搬起小板凳快來圍觀吧!


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      血清實驗中常見的問題解析:

      一、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

      將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

      長時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復凍融。

      建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

      二、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?

      沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。

      三、 培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

      一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

      四、 為什么要熱滅活血清?

      加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

      五、 有必要做熱滅活嗎?

      實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。

      而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增。

      非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間,更確保血清的質量!

      六、細胞培養 中出現黑點是污染嗎?如何處理?

      一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

      七、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

      來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

      組份與比例不同:兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

      血清保存和使用須注意:血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。

      解凍血清時 ,應先將血清至于2-8℃冰箱,并經常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活后,應按用量分裝并于-20℃保存,避免反復凍融。

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