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    技術支持

    細菌對于蛋白質和氨基酸的代謝試驗

    發布時間:2022-05-31   點擊次數:73次

     細菌對于蛋白質和氨基酸的代謝原理為:不同種類的細菌分解蛋白質的能力不同。細菌對蛋白質的分解,一般先由胞外酶將復雜的蛋白質分解為短肽(或氨基酸),滲入菌體內,然后再由胞內酶將肽類分解為氨基酸。具體試驗方法有:①明膠液化試驗;②吲哚試驗(靛基質試驗);③硫化氫試驗;④尿素酶試驗;⑤苯丙/氨酸脫氨酶試驗;⑥氨基酸脫羧酶試驗。

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    1.明膠液化試驗

    (1)原理:某些細菌可產生一種胞外酶-明膠酶,能使明膠分解為氨基酸,從而失去凝固力,半固體的明膠培養基成為流動的液體。

    (2)方法:將被檢菌穿刺接種于明膠培養基,于22℃培養7d,逐日觀察結果。若用35℃孵育,因明膠在此溫度下自行液化,故在觀察結果前,先置4℃冰箱內30min,再看結果。

    (3)結果:培養基呈液化狀態為陽性。

    (4)應用:腸桿菌科細菌的鑒別,如沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠,而其他細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外多數假單胞菌也能液化明膠醫學教|育網搜集整理。

    2.吲哚(靛基質)試驗

    (1)原理:某些細菌具有色/氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色/氨酸生成吲哚(靛基質),當加入吲哚試劑(對位二甲氨基苯/甲醛)后則形成紅色的玫瑰吲哚。

    (2)培養基:蛋白胨水培養基。

    (3)方法:將待檢菌接種于上述培養基中,于35℃培養24~48h,沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。

    (4)結果:于兩者液面接觸處出現紅色為陽性,無色為陰性。

    (5)應用:主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。

    3.硫化氫試驗

    (1)原理:某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸(如胱/氨酸、半胱氨/酸)產生硫化氫,硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗可間接檢測細菌是否產生硫化氫。

    (2)培養基:醋酸鉛培養基。

    (3)方法:將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養基,于35℃培養24~48h觀察結果。

    (4)結果:培養基變黑為陽性,不變為陰性。

    (5)應用:主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬細菌,絕大多數硫化氫陽性,其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。

    4.尿素分解試驗

    (1)原理:某些細菌具有尿素分解酶,能分解尿素產生大量的氨,使培養基呈堿性。

    (2)培養基:尿素培養基。

    (3)方法:將待檢菌接種于尿素培養基,于35℃培養18~24h觀察結果。

    (4)結果:培養基呈堿性,使酚紅指示劑變紅為陽性,不變為陰性。

    (5)應用:主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽性,而斯氏和產堿普羅威登菌陰性。

    5.苯丙/氨酸脫氨酶試驗

    (1)原理:某些細菌可產生苯丙/氨酸脫氨酶,使苯丙氨/酸脫去氨基,形成苯/丙酮酸,加入氯化鐵試劑后產生綠色反應。

    (2)培養基:苯丙/氨酸瓊脂培養基。

    (3)方法:將被檢菌濃厚接種于苯丙氨/酸瓊脂培養基斜面上,于35℃培養18~24h,滴加10%三氯化鐵試劑3~4滴,自斜面上方流下。

    (4)結果:出現綠色為陽性。應立即觀察結果,延長反應時問會引起褪色。

    (5)應用:主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬細菌均為陽性,腸桿菌種中其他細菌均為陰性。

    6.氨基酸脫羧酶試驗

    (1)原理:具有氨基酸脫羧酶的細菌,能分解氨基酸使其脫羧生成胺(賴氨酸→尸胺,鳥氨/酸→腐胺,精/氨酸→精胺)和二氧化碳,使培養基變堿。使指示劑顯示出來。

    (2)培養基:氨基酸脫羧酶培養基和氨基酸對照培養基。

    (3)方法:將被檢菌分別接種于賴氨酸(或鳥氨/酸或精/氨酸)培養基和氨基酸對照培養基中,并加入無菌液體石蠟或礦物油,于35℃培養l~4d,每日觀察結果醫學教|育網搜集整理。

    (4)結果:對照管應呈黃色,測定管呈紫色(指示劑為溴甲酚紫)為陽性,若測定管呈黃色為陰性。若對照管呈現紫色則試驗無意義,不能作出判斷。

    (5)應用:主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。如沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌外,其余沙門菌的賴氨酸和鳥氨/酸脫羧酶均為陽性。志賀菌屬除宋內和鮑氏志賀菌外,其他志賀菌均為陰性。

     

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