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    技術支持

    做實驗薄層色譜法的相關知識要了解!

    發布時間:2022-06-15   點擊次數:93次

      薄層色譜法,系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。

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    1.儀器與材料

    (1) 玻板 除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。

    (2) 固定相或載體 最/常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。 其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上, 后者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10~15%煅/石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時),混勻后加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調成糊狀,均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。

    (3) 涂布器 應能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

    (4) 點樣器 同紙色譜法項下。

    (5) 展開室 應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴密的蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便于觀察。

    2.操作方法

    (1) 薄層板制備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2~0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

    (2) 點樣 除另有規定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

    (3) 展開 展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡或按正文規定操作。 將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規定檢測。

    (4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。 薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。

     

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