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    上海遠慕生物科技有限公司
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    技術支持

    藥物分析實驗試劑盒選擇遠慕生物!

    發布時間:2022-06-30   點擊次數:43次

     

     藥物的含量測定可分為兩大類,即基于化學或物理學原理的“含量測定”和基于生物學原理的“效價測定”。其中,效價測定法(包括生物檢定法、微生物檢定法、酶法)的方法建立與驗證過程各具特殊性,本章將主要探討基于化學或物理學的“含量測定”。

    藥物含量測定的分析方法主要包括:容量分析法(滴定法)、光譜分析法和色譜分析法。其中,容量分析法操作簡便,結果準確,方法耐用性高,當方法缺乏專屬性,主要適用于對結果準確度與精密度要求較高的藥品測定;光譜分析法簡便快速,靈敏度高,并具有一定的準確度,但方法專屬性稍差,主要適用于對靈敏度要求較高、樣本量較大的分析項目;色譜分析法則具有高靈敏度與高專屬性,并具有一定的準確度,但其結果計算需要對照品,本法主要使用于對方法的專屬性與靈敏度要求較高的復雜樣品的含量測定。

    1、容量分析法 
    容量分析法(也叫滴定法),是將已知濃度的滴定液(標準物質溶液)由滴定管滴加到被測藥物的溶液中,直至滴定液中的標準物質(常稱為滴定劑)與被測藥物反應完全(通過適當方法指示),然后根據滴定液中滴定劑的濃度(一般稱為滴定液濃度)和被消耗的體積,按化學計量關系計算出被測藥物的含量。

    1、容量分析法的特點
    (1)方法簡便易行:本法所用儀器價廉易得,操作簡便、快速。
    (2)方法耐用性高:影響本法測定的試驗條件與環境因素較少。
    (3)測定結果準確:通常情況下本法的相對誤差在0.2%以下,適用于對準確度要求較高的試樣的分析。
    (4)方法專屬性差:本法對結構相近的有關物質或其他干擾測定的雜質缺乏選擇性,故一般適用于主成分含量較高的試樣的分析。

    2、容量分析法的使用范圍
    由于容量分析法具有以上特點,被廣泛應用于化學原料藥物的含量測定,而較少應用于藥物制劑的含量測定。

    3、容量分析法的有關計算
    (1)滴定度
    指每1ml規定濃度的滴定液所相當的被測藥物的質量,《中國藥典》用毫克(mg)表示。例如用碘量法測定維生/素C的含量時,ChP規定:每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6(維生/素C)。

    (2)滴定度的計算通式
     T(mg/ml)=m×(a/b)×M
     式中,m為滴定液的摩爾濃度(mol/L);a、b分別為滴定反應式中被測藥物與滴定劑的摩爾數;M為被測藥物的毫摩爾質量(分子量,以mg表示)。

    (3)含量的計算
    此法測定藥物含量時候,有直接滴定和間接滴定兩種。直接滴定法:本法是用滴定液直接滴定被測藥物,則被測藥物的百分含量計算公式,式中,W是稱取量,V是消耗體積,T是滴定度
    間接滴定法:包括生成物滴定法和剩余量滴定法。

    2、光譜分析法 
    光譜分析法所用的波長范圍包括從紫外區至紅外區。所用儀器為紫外分光光度計、可見分光光度計、紅外分光光度計、熒光分光光度計、原子吸收分光光度計,以及光散射計和拉曼光譜儀。
    《中國藥典》收載的常用的分光光度法有:紫外-可見分光度法、紅外分光度法和原子吸收分光光度法等。

    1、紫外-可見分光光度法
    本方法是在190~800nm波長范圍內測定物質的吸光度,用于藥物的鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。

    (1)朗伯比爾定律
    在一定的濃度范圍內被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度成正比

    (2)方法特點與適用范圍
    鑒別易行:本法使用的儀器價格較低廉,操作簡單,易于普及。
    靈敏度高:本法靈敏度可達10-6g/ml,適用于低濃度試樣的分析。
    準確度較高:本法的相對誤差不大于2%,適用于對測定結果的準確度有較高要求的試樣的分析。
    專屬性較差:本法通常不受一般雜質的干擾,但對結構相近的有關物質缺乏選擇性。

    (3)儀器校正和檢定
    波長:由于環境的影響,儀器的波長經常會略有變動。除了應定期對所用儀器進行全面校正檢定外,還應于測定前校正測定波長。
    吸光度的準確度:可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
    雜散光的檢查:可按照表格4-2所累的試劑和濃度,制成水溶液,置1cm石英吸收池中,在規定的波長處測定透光率,應符合規定。

    3、色譜分析法 
    色譜分析法是一種分離分析方法,是根據混合物中被分離物質的色譜行為差異,將各組分從混合物中分離后再選擇性對被測組分進行分析的方法。因此色譜分析法是分析混合物的有力手段。

    色譜分析法分為:1、依據分離方式分類:可分為紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。2、依據分離原理分類:可分為吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法與分子排阻色譜法(凝膠色譜法)等。

    (一)高效液相色譜法(HPLC)
    1、方法的特點與適用范圍:
    高靈敏度:根據檢測器的不同,HPLC的最/低檢出濃度可達10-12~10-9g/ml。
    高專屬性:HPLC可有效分離復雜基質樣品中與被測組分結構相近的有關雜質或無關干擾物,檢測信號具有較高的專屬性,可實現對被測組分的選擇性檢測。

    高效能與高速度:HPLC通??稍?0~20分鐘內完成藥物的定量分析,或在30分鐘內完成藥物復方制劑中多組分同時定量測定,也可在60分鐘內完成藥物中有關物質的分離與同時定量。

    2、測定法
    定量測定時,可根據供試品或儀器的具體情況以峰面積或峰高計算。目前大多數以峰面積計算。常用兩種方法如下:
    內標法:按各品種項下規定,精密稱定藥物對照品和內標物質,分別制成溶液,各精密量取適量,混合制成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入儀器,記錄色譜圖。分別測量藥物對照品和內標物質色譜峰面積或峰高,按式子計算校正因子f:式中,AS為內標物質的峰面積(或峰高);AR為藥物對照品的峰面積(或峰高);CS為內標物質的濃度;CR為對照品的濃度。
    再取各品種項下含有內標物在的供試品溶液,進樣,記錄色譜圖,測量供試品中被測物質和內標物質色譜峰的峰面積或峰高,按式子計算含量:式中,AX為供試品中被測藥物的峰面積(或峰高);cX為供試品溶液的濃度;f為校正因子;A'S和c'S為內標物質的峰面積(或峰高)和濃度。 

    采用內標法,可避免因供試品前處理及進樣體積誤差對結果的影響。

    外標法:按各品種項下的規定,精密稱量對照品和供試品,制成溶液,分別精密取一定量,進樣,記錄色譜圖,測量對照品溶液和供試品溶液中被測物質的峰面積(或峰高),按式子計算含量:式中,AX為供試品中被測藥物的峰面積(或峰高);AR為藥物對照品的峰面積(或峰高); CR為對照品的濃度。
    外標法簡便,但要求進樣量準確及操作條件穩定。由于微量注射器不易精確控制進樣量,當采用外標法測定含量時,以手動進樣器定量環或自動進樣器進樣為宜。

    (二)氣相色譜法(GC)
    氣相色譜法采用氣體為流動相(載氣)流經裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。物質或其衍生物氣化后,被載氣帶入色譜柱進行分離,各組分先后進入檢測器,用數據處理系統記錄色譜信號。 

    1、方法的特點與適用范圍
    本法主要應用于具有揮發性或其衍生物具有揮發性的藥物及其相關物質的分析,在ChP2015中被廣泛應用于殘留溶劑測定法,也應用于水分測定法、酒劑或酊劑中甲醇量檢查法等相關雜質的檢查和維生/素E等部分脂溶性較強的藥物及其制劑的含量測定等。

    2、測定法
    分為內標法、外標法及加入法測定。內標法、外標法同高效液相色譜法,這里主要介紹加入法:
    精密稱取被測組分對照品適量,制成適當濃度的對照品溶液,取一定量,精密加入至供試品溶液中,根據外標法或內標法測定被測組分含量,再扣除加入的被測組分對照品的量,即得供試品中被測組分的含量。

    由于加入對照品溶液前后校正因子應相同,即: 式中,cX為供試品中被測組分X的濃度;AX為供試品中被測組分X的色譜峰面積;△cX為所加入的已知濃度的被測組分的對照品的濃度;Ais為加入對照品后被測組分X的色譜峰面積。 

    由于氣相色譜法的進樣量一般僅數微升,為減小進樣誤差,尤其當采用手動進樣時,由于留針時間和室溫等對進樣量也有影響,故以采用內標法定量為宜;若采用自動進樣器進樣時,由于進樣重復性的提高,在保證分析誤差的前提下,也可采用外標法定量。

    當采用頂空進樣時,由于供試品和對照品處于不完全相同的基質中,故可采用標準溶液加入法以消除基質效應的影響;當標準溶液加入法與其他定量方法結果不一致時,應以標準溶液加入法結果為準。

     

     

     

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